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研究脂質(zhì)體釋放行為的評(píng)估方法的研究進(jìn)度

來(lái)源

“醫(yī)學(xué)先驅(qū)”第42卷，第3期，2023年3月

作者

Song Bo，Huang Ying，Guo Yingshan

國(guó)家藥物管理局的食品和藥物審查與檢查中心

河北省藥物審查中心

概括

只有從脂質(zhì)體釋放活性藥物時(shí)，它們才能進(jìn)一步在體內(nèi)起治療作用。可以通過(guò)體外釋放行為模擬脂質(zhì)體藥物釋放過(guò)程。因此，體外釋放行為是脂質(zhì)體的重要質(zhì)量控制指標(biāo)。文獻(xiàn)中報(bào)道的常用脂質(zhì)體釋放行為評(píng)估方法包括采樣和分離方法，透析方法，流細(xì)胞法，F(xiàn)ranz擴(kuò)散細(xì)胞法，使用室方法以及一些改進(jìn)和優(yōu)化的方法。每種評(píng)估方法都有特定的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用程序限制。目前，中華人民共和國(guó)的藥典并未指定脂質(zhì)體在體外釋放的評(píng)估方法，在一定程度上會(huì)阻礙脂質(zhì)體的應(yīng)用。因此，研究和建立具有良好可重復(fù)性，強(qiáng)大可操作性和高標(biāo)準(zhǔn)化的體外釋放方法是在脂質(zhì)體發(fā)育過(guò)程中解決的一個(gè)緊迫問(wèn)題。本文總結(jié)了近年來(lái)脂質(zhì)體在體外釋放行為評(píng)估方法的當(dāng)前研究狀態(tài)和應(yīng)用，并分析了每種釋放方法的特征，以便為開(kāi)發(fā)和改善脂質(zhì)體的體外釋放行為評(píng)估方法提供參考。

關(guān)鍵字

脂質(zhì)體；體外釋放行為；評(píng)估方法

文本

脂質(zhì)體是由脂質(zhì)雙層形成的封閉囊泡。囊泡中的水相和雙層可以用不同類(lèi)型的活性藥物包裹。與其他傳統(tǒng)的藥物載體系統(tǒng)相比，脂質(zhì)體可以基于納米結(jié)構(gòu)特征改善藥物的滲透性和溶解度，改善不溶性藥物的口服生物利用度，并通過(guò)攜帶活性藥物，提高功效，降低毒性和副作用并改善患者的內(nèi)部和外部穩(wěn)定性，并提高制劑的內(nèi)部和外部穩(wěn)定性。

鑒于正在注冊(cè)和宣布的脂質(zhì)體產(chǎn)品越來(lái)越多，美國(guó)，歐盟和中國(guó)已經(jīng)制定了相應(yīng)的脂質(zhì)體開(kāi)發(fā)指導(dǎo)原則。這些指導(dǎo)性原則都將體外釋放行為視為脂質(zhì)體的重要質(zhì)量控制指標(biāo)，并且在脂質(zhì)體發(fā)育過(guò)程中需要足夠的研究，因?yàn)樗幬镝尫牛眨w內(nèi)安全性，有效性和脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性可以反映在體外釋放行為中。

但是，中華人民共和國(guó)的當(dāng)前“藥典”標(biāo)準(zhǔn)并未指定脂質(zhì)體在體外釋放的評(píng)估方法。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）僅在“脂質(zhì)體藥物CMC），人類(lèi)藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究和標(biāo)簽管理中指出，“企業(yè)應(yīng)建立經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的體外釋放測(cè)定分析方法”，并且未指定參考方法。歐洲藥品局（EMA）尚未發(fā)布脂質(zhì)體釋放行為的評(píng)估方法。此外，由于對(duì)脂質(zhì)體藥物釋放機(jī)制的理解不足，研究人員本身開(kāi)發(fā)的方法[2-5]通常缺乏科學(xué)性，規(guī)范性和靶向性，因此難以準(zhǔn)確評(píng)估脂質(zhì)體藥物釋放過(guò)程，這在一定程度上會(huì)影響脂質(zhì)體的發(fā)育和應(yīng)用。

在本文中，作者主要結(jié)合脂質(zhì)體的特征，以概述脂質(zhì)體在國(guó)內(nèi)外的體外釋放行為的評(píng)估方法，簡(jiǎn)要介紹了特定的操作，分析了這些方法的應(yīng)用預(yù)防措施，并提出了在釋放Intrro的行為方面的關(guān)鍵點(diǎn)，以促進(jìn)LIP的發(fā)展方法。

常見(jiàn)的體外釋放方法

表1顯示了體外脂質(zhì)體釋放行為評(píng)估方法的優(yōu)勢(shì)和缺點(diǎn)的摘要。

1.1采樣和分離方法

采樣和分離方法是一種方法，可以通過(guò)參考口服制備溶解方法將脂質(zhì)體直接放置在釋放培養(yǎng)基中，控制攪拌的速度和中等溫度，并在取樣和過(guò)濾后測(cè)量藥物含量，離心，超濾，超濾或集中釋放超過(guò)釋放的藥物釋放量，并評(píng)估藥物的釋放量，并將其釋放到藥物的釋放量上，并將其釋放為藥物的釋放量 曲線(xiàn)。

影響采樣和分離方法的主要因素包括中等溫度，攪拌速度和中等類(lèi)型。根據(jù)劑量位點(diǎn)，溫度在（37±0.5）或（32±0.5）℃中進(jìn)行控制以模擬皮膚溫度；適當(dāng)?shù)臄嚢杷俣瓤梢苑乐怪|(zhì)體聚集，并使釋放的免費(fèi)藥物平均分散在培養(yǎng)基中；釋放介質(zhì)可能會(huì)影響藥物的穩(wěn)定性和釋放速率，并且需要根據(jù)吸收位點(diǎn)和評(píng)估方法進(jìn)行合理選擇。

Tang Lanru等。 [6]使用薄膜超聲分散方法制備daidase和木蘭組合長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，然后由脂質(zhì)體制成，由脂質(zhì)體制成，脂質(zhì)體和氫氯噻嗪，非芳烴和輔助材料制成，以制備Weiweeweiweiweiajunan脂質(zhì)體片劑。 Jiawei Majunan脂質(zhì)體片劑和市售Majunan片劑的體外釋放行為進(jìn)行了比較并通過(guò)采樣和分離方法進(jìn)行了研究。采樣后測(cè)量藥物含量。研究發(fā)現(xiàn)，與商業(yè)上獲得的Maijunan片劑相比，Jiawei Maijunan脂質(zhì)體在體外緩慢釋放，并且預(yù)計(jì)它將在體內(nèi)具有一定的持續(xù)釋放作用，這與高血壓藥物的特征相符，并具有進(jìn)一步發(fā)育的潛力。

采樣和分離方法中使用的設(shè)備更為常見(jiàn)，攪拌方法和采樣技術(shù)很簡(jiǎn)單，該方法更加成熟。但是，采樣過(guò)濾，尤其是離心或超濾，可能會(huì)破壞脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，而脂質(zhì)體在過(guò)濾過(guò)程中傾向于堵塞過(guò)濾器孔，這將影響測(cè)定的準(zhǔn)確性。因此，選擇采樣和分離方法時(shí)，您需要注意這些不利因素并在操作過(guò)程中控制它們。

1.2透析法

透析袋可以攔截某些相對(duì)分子量物質(zhì)。透析方法是一種通過(guò)使用透析袋將釋放的免費(fèi)藥物與脂質(zhì)體中包含的藥物物理分開(kāi)的方法，在特定的時(shí)間點(diǎn)處釋放培養(yǎng)基，確定藥物濃度并評(píng)估脂質(zhì)體釋放行為[7]。在脂質(zhì)體的體外釋放行為的評(píng)估方法中，透析方法被廣泛使用。根據(jù)不同的設(shè)備和脂質(zhì)體添加位置，透析方法被分為正向動(dòng)態(tài)透析方法和反向動(dòng)態(tài)透析方法。

1.2.1正向動(dòng)態(tài)透析法

正向動(dòng)態(tài)透析是一種將脂質(zhì)體密封在透析袋中，將兩端密封并將其放在釋放培養(yǎng)基上，在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)上取出適當(dāng)量的釋放培養(yǎng)基，并通過(guò)測(cè)量藥物含量在體外評(píng)估藥物釋放行為的方法。使用這種方法，脂質(zhì)體不會(huì)直接與培養(yǎng)基接觸，并且可以通過(guò)透析袋進(jìn)行物理隔離。通常，透析袋中的脂質(zhì)體溶液的體積比容器中的釋放介質(zhì)的體積小得多。

Wu Siyu等。 [8]使用乙醇注射方法來(lái)制備姜黃素/baicalin修飾的環(huán)狀肽修飾的納米脂質(zhì)體，并使用前遠(yuǎn)程動(dòng)態(tài)透析方法來(lái)進(jìn)行體外釋放研究。將脂質(zhì)體溶液包裝成透析袋中，并密封，放置在釋放培養(yǎng)基中，攪拌，定期采樣并補(bǔ)充水分。研究表明，脂質(zhì)體的釋放順利，具有一定的持續(xù)釋放效果。

Lin Wen等。 [9]使用反向蒸發(fā)制備替莫唑胺脂質(zhì)體并使用正向動(dòng)態(tài)透析來(lái)研究體外藥物釋放行為。將脂質(zhì)體溶液放在透析袋中，兩端用夾子固定，并將其放入100ml磷酸鹽緩沖液溶液（pH值5.0）中，在37℃水浴處絕緣，振蕩速度為100r·min-1，定期進(jìn)行采樣，并加入空白介質(zhì)。研究表明，脂質(zhì)體在最初的2小時(shí)內(nèi)處于爆發(fā)階段，大約60％釋放，然后進(jìn)入持續(xù)的釋放階段。藥物釋放速率降低了，基本上在6小時(shí)后釋放。

Zhao di等。 [10]制備了通過(guò)薄膜色散方法吸入的remdesivir脂質(zhì)體，并使用了正向動(dòng)態(tài)透析方法來(lái)檢查體外藥物釋放行為。將Remdesivir脂質(zhì)體溶液放在透析袋中。透析袋保持相對(duì)分子質(zhì)量為3500，溶解培養(yǎng)基為200ml模擬的肺液，采樣體積為1ml，在37°C下控制溫度，并在采樣后立即補(bǔ)充液體。研究發(fā)現(xiàn)，可以在該版本的培養(yǎng)基中釋放remdesivir脂質(zhì)體約4小時(shí)。

正向動(dòng)態(tài)透析方法易于操作，并且對(duì)設(shè)備的要求較低。采樣后無(wú)需進(jìn)行過(guò)濾操作，以分離脂質(zhì)體和免費(fèi)藥物。但是，有必要注意藥物和透析袋的兼容性以及藥物的吸附。此外，透析袋中的水層幾乎沒(méi)有散發(fā)，這會(huì)影響脂質(zhì)體釋放速率。此外，攪拌的速度不應(yīng)太快，否則會(huì)導(dǎo)致透析袋移動(dòng)得太快或振幅太大，這很容易造成損壞并導(dǎo)致藥物泄漏。

1.2.2反向動(dòng)態(tài)透析法

反向動(dòng)態(tài)透析方法是一種釋放方法，其中脂質(zhì)體直接與釋放介質(zhì)接觸，即將樣品分散在透析袋外部較大體積的培養(yǎng)基中。這種方法可以大大稀釋脂質(zhì)體，可以更好地模擬內(nèi)部環(huán)境中脂質(zhì)體的釋放行為。

Dai Yabin等。 [11]使用薄膜色散方法制備triptonide（TPN）脂質(zhì)體，并使用反向動(dòng)態(tài)透析方法來(lái)評(píng)估TPN脂質(zhì)體的體外釋放。服用1毫升空白介質(zhì)將其放入透析袋中。透析袋的分子量為14×106。然后，將透析袋放在燒杯中，并將37毫升釋放培養(yǎng)基添加到燒杯中。在添加藥物之前，將透析袋的內(nèi)部和外部環(huán)境完全平衡，并采用2 mL TPN脂質(zhì)體溶液來(lái)添加透析袋的外部釋放介質(zhì)，并在37°C下控制溫度，并打開(kāi)攪拌。定期從透析袋中采樣100μl，以確定透析袋中的總TPN濃度。研究發(fā)現(xiàn)，沒(méi)有突然釋放TPN脂質(zhì)體，并且快速釋放期在釋放后60分鐘內(nèi)。在360分鐘時(shí)，TPN脂質(zhì)體基本上完全釋放。

Jia Dongsheng等。 [12]使用乙醇注射方法制備伊卡汀（IT）脂質(zhì)體，并使用反向動(dòng)態(tài)透析方法來(lái)確定IT脂質(zhì)體的藥物釋放特性。釋放培養(yǎng)基為20％磷酸甲醇緩沖液。空白培養(yǎng)基為1 mL，兩端都關(guān)閉釋放培養(yǎng)基。透析袋外部的培養(yǎng)基體積為200 mL，溫度在37°C下受到控制。使用（100±5）R·min-1頻率在2小時(shí)以（100±5）r·min-1頻率進(jìn)行振蕩進(jìn)行系統(tǒng)平衡。將適當(dāng)?shù)腎T脂質(zhì)體添加到透析袋外的釋放培養(yǎng)基中。在指定時(shí)間采樣后測(cè)量透析袋中的藥物濃度。研究表明，IT脂質(zhì)體的體外釋放行為顯示出持續(xù)的釋放特征，累積釋放體積在72小時(shí)時(shí)> 90％。

無(wú)論是正向動(dòng)態(tài)透析方法還是反向動(dòng)態(tài)透析方法阿糖胞苷的英文，透析袋的使用都具有不同的大小和形狀等缺點(diǎn)，并且缺乏科學(xué)性在選擇保留分子量的情況下。此外，容器的使用更加休閑，采樣方法是不合理的，并且攪拌速度不固定，這將影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性，這也限制了透析方法作為脂質(zhì)體的體外釋放評(píng)估方法的可行性。

1.3使用室法

脂質(zhì)體進(jìn)入人體后，通常首先進(jìn)行藥物釋放。處方技術(shù)和其他因素將對(duì)體內(nèi)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)行為產(chǎn)生影響，這反過(guò)來(lái)會(huì)影響脂質(zhì)體臨床使用的有效性和安全性。然而，僅傳統(tǒng)藥房體外評(píng)估指標(biāo)的比較不能完全反映不同脂質(zhì)體的藥物釋放行為的差異。因此，為了充分評(píng)估脂質(zhì)體產(chǎn)物的特征，除了考慮釋放行為外，還必須對(duì)保留組織藥物的比較研究，以充分研究組織中脂質(zhì)體的釋放和殘基。 Ussing Chamber和Franz擴(kuò)散池可以滿(mǎn)足對(duì)藥物釋放行為和組織保留的研究需求。這兩種設(shè)備可用于評(píng)估脂質(zhì)體的體外釋放，以及藥物的膜滲透性和在組織中的藥物保留。因此，它們更常用于不可注射的藥物脂質(zhì)體的發(fā)展，例如脂質(zhì)體凝膠，局部脂質(zhì)體等。

Ussing Chamber是由丹麥科學(xué)家發(fā)明的。它主要由樁室和電路系統(tǒng)組成。樁室的兩個(gè)溶液儲(chǔ)層分別用于放置釋放介質(zhì)和測(cè)試樣品解決方案。堆積方法包括兩種類(lèi)型：循環(huán)和連續(xù)。還有一個(gè)管道系統(tǒng)，用于加熱和填充特定比例的氣體（CO2，O2或N2）。電路系統(tǒng)用于測(cè)量電壓，電流，電容等[13]。使用室技術(shù)可以在脂質(zhì)體藥物釋放期間保持膜完整性和活性，并更真實(shí)地模擬體內(nèi)藥物釋放環(huán)境。

一般而言，在口服藥物加載的脂質(zhì)體后，大多數(shù)藥物已從脂質(zhì)體中釋放出來(lái)，或者在通過(guò)上消化道上的上部消化道時(shí)被吸收到血液中。但是，結(jié)腸定位和給藥技術(shù)可以在結(jié)腸部位實(shí)現(xiàn)釋放藥物負(fù)載的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體可以確保脂質(zhì)體在達(dá)到藥物釋放位點(diǎn)之前保持結(jié)構(gòu)完整性，從而更好地發(fā)揮其獨(dú)特的治療作用。地塞米松磷酸鈉是臨床實(shí)踐中常用的抗炎藥，其溶液通常用于通過(guò)灌腸來(lái)治療各種結(jié)腸炎癥。 Li Guofeng等。 [14]使用二級(jí)乳化來(lái)制備地塞米松磷酸鈉（DSP）脂質(zhì)體。使用室內(nèi)的體外實(shí)驗(yàn)方法用于研究DSP脂質(zhì)體的累積滲透性和粘膜中的分布。孤立的結(jié)腸粘膜固定在使用室裝置上。立即將6 mL的培養(yǎng)基溶液添加到設(shè)備的粘膜和漿液側(cè)，并將整個(gè)設(shè)備置于37°C的恒溫環(huán)境中，并將混合的氧氣和氮?dú)膺B續(xù)引入兩側(cè)，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。 30分鐘后，將1 mL的脂質(zhì)體溶液加入粘膜和漿液側(cè)，并將1 mL磷酸鈉溶液添加到粘膜側(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，該脂質(zhì)體可以延遲并降低結(jié)腸粘膜中磷酸鈉的滲透性。

盡管某些脂質(zhì)體可以在皮膚，口腔，眼睛和直腸中使用，并且具有增加局部粘膜組織中藥物濃度并降低藥物吸收速度到血液中的優(yōu)點(diǎn)，但這種類(lèi)型的脂質(zhì)體制劑或口服脂質(zhì)體制劑或口服脂質(zhì)體制備相對(duì)較少，因此在室內(nèi)中，大多數(shù)是在使用Laboration compultors combord combord combord combord fit的研究。

1.4 Franz擴(kuò)散池法

Franz擴(kuò)散細(xì)胞可以模擬脂質(zhì)體在半透明的膜或屏障（例如皮膚和腸壁）中的擴(kuò)散效應(yīng)。它由供應(yīng)室和一個(gè)接收室組成，該室被膜層隔開(kāi)。將一定數(shù)量的脂質(zhì)體放在供應(yīng)室中，并將釋放培養(yǎng)基放置在接收室中。可以通過(guò)膜層轉(zhuǎn)移到接收室中的釋放培養(yǎng)基中。在釋放過(guò)程中，需要控制攪拌速度和中等溫度。弗朗茲擴(kuò)散池中使用的膜可以是人類(lèi)和動(dòng)物的透析袋，人工模擬膜，細(xì)胞以及皮膚或上皮組織。使用FRANZ擴(kuò)散細(xì)胞進(jìn)行體外測(cè)試可以特別反映局部藥物使用脂質(zhì)體或半穩(wěn)態(tài)脂質(zhì)體的藥物釋放過(guò)程[15]。

宗博等人。 [16]使用薄膜蒸發(fā)方法來(lái)制備殼聚糖改性的麻黃堿脂質(zhì)體凝膠劑，并使用Franz擴(kuò)散裝置在體外釋放和滲透性測(cè)試中執(zhí)行。將測(cè)試樣品溶液放置在供應(yīng)室中并密封在頂部。處理后的大鼠皮膚在供應(yīng)室和接收室之間固定網(wǎng)校頭條，并將釋放培養(yǎng)基注入接收室，對(duì)照溫度為37°C，培養(yǎng)基為磷酸鹽緩沖液，pH為6.8。在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)取樣并補(bǔ)充樣品。研究表明，與普通劑型相比，脂質(zhì)體中麻黃堿具有良好的持續(xù)釋放性能，并且可以緩慢釋放，并且可以通過(guò)大鼠皮膚到達(dá)接收室。

Song Juan等。 [17]使用反向蒸發(fā)來(lái)制備上瓜酸果仁酸酯脂質(zhì)體（EGCG-PL），并使用franz擴(kuò)散裝置比較了EGCG-PL和EGCG-PS在體外的eGCG-PL和EGCG-PS的透皮性質(zhì)差異。該培養(yǎng)基為20％乙醇溶液。膜材料使用經(jīng)過(guò)處理的大鼠皮膚來(lái)確保培養(yǎng)基與大鼠皮膚完全接觸。將EGCG-PL和EGCG-PS添加到供應(yīng)室中阿糖胞苷的英文，并密封其頂部以防止溶液蒸發(fā)，并消除了氣泡干擾。攪拌速度為400R·min-1，控制溫度（32±0.5）℃，??定期采樣5ML，并立即補(bǔ)充相等的空白介質(zhì)。在不同時(shí)間，在接收液中的EGCG，牛con和異索濃度的濃度由高性能液相色譜（HPLC）確定。研究結(jié)果表明，EGCG-PL中EGCG，Coralen和Isopsoralen的每單位區(qū)域的累積滲透性和組織保留率明顯高于EGCG-PS。

除了脂質(zhì)體處方因子外，諸如攪拌速度，膜材料，源，結(jié)構(gòu)和厚度，溫度和樣品體積等因素還會(huì)影響Franz擴(kuò)散池的體外釋放曲線(xiàn)。 Franz擴(kuò)散池法的優(yōu)點(diǎn)是該設(shè)備的成本低且易于操作。采樣后，它不需要進(jìn)一步的過(guò)濾和分離，這可以避免藥物丟失。缺點(diǎn)是難以確保攪拌效果，并且難以清除氣泡，這可能會(huì)導(dǎo)致接收室中釋放的藥物的分布不均勻。 Franz擴(kuò)散池最初是用于在體外研究藥物釋放和無(wú)菌半固體制劑的透皮作用的研究，因此對(duì)其他劑型或其他給藥途徑的脂質(zhì)體幾乎沒(méi)有適用性。

1.5流池法

流動(dòng)池方法是一種使用恒定流動(dòng)泵將釋放培養(yǎng)基穿透流動(dòng)池，通過(guò)上端過(guò)濾并測(cè)量溶液中的藥物濃度的方法。主要控制參數(shù)包括中等溫度，泵流速，中等類(lèi)型，流量方法等。[18]。流動(dòng)池有兩種類(lèi)型的流動(dòng)池，包括循環(huán)流通電池法和開(kāi)放流動(dòng)池法，其中開(kāi)放流細(xì)胞方法釋放介質(zhì)在通過(guò)流動(dòng)池后不會(huì)返回，而是使用自動(dòng)采樣設(shè)備在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行采樣，以確保脂質(zhì)體與空白釋放介質(zhì)完全接觸并保持合適的排水條件。

Yuan等。 [19]構(gòu)建了一種基于阿霉素（DOX）脂質(zhì)體的流量細(xì)胞的體外評(píng)估方法。該釋放培養(yǎng)基為100mmol。1NH4HCO3，5％蔗糖，75mmol·l-12-（N-甲酚）乙磺酸和5％羥丙基甲基二克酮溶液。中體積為78.4 mL，觀察到的溫度為37、45和55°C，流速為16ml·min-1，并以循環(huán)模式添加樣品。研究表明，將NH4HCO3添加到釋放培養(yǎng)基中可以促進(jìn)DOX脂質(zhì)體的釋放，但會(huì)導(dǎo)致藥物沉淀。在釋放培養(yǎng)基中添加羥丙基 - 環(huán)糊精可以防止DOX脂質(zhì)體沉淀。優(yōu)化的釋放度確定方法可以區(qū)分不同的組件，物理和化學(xué)特性以及制備方法DOX脂質(zhì)體制備。

Zhang Bei [20]使用小分子抗腫瘤藥物Cytarabine（ARA-C）作為模型藥物，并使用薄膜分散法設(shè)計(jì)和制備內(nèi)部凝膠脂質(zhì)體。該流細(xì)胞方法用于評(píng)估內(nèi)部凝膠脂質(zhì)體（ARA-C-GL）和普通脂質(zhì)體（ARA-C-CL）的體外釋放行為。樣品細(xì)胞直徑為22.6毫米，控制溫度（37±0.5）℃，??釋放培養(yǎng)基為5％葡萄糖（添加了1％疊氮化鈉）和0.5 mL樣品體積。將脂質(zhì)體放入透析袋中，將兩端的口袋密封，然后將其放入樣品池中。將直徑為5mm的紅寶石保護(hù)水入口管放在樣品單元的尖端。通過(guò)CY-7活塞泵從中型放置瓶中轉(zhuǎn)移到流動(dòng)池中。計(jì)算機(jī)控制的采樣器在預(yù)定的時(shí)間取樣，HPLC測(cè)量了樣品濃度。研究結(jié)果表明，隨著流速的增加，ARA-C-GL的釋放加速和釋放量??增加。與ARA-C-CL相比，ARA-C-GL的釋放在早期階段比ARA-C-CL快，并且在后期的整體釋放速度明顯慢于ARA-C-CL，顯示出更好的持續(xù)釋放效應(yīng)。

流細(xì)胞方法是一種可靠的體外釋放分析方法，用于復(fù)雜的脂質(zhì)體產(chǎn)物，該方法受工作誤差的影響較小。對(duì)于長(zhǎng)效脂質(zhì)體制劑，循環(huán)流通電池法可以有效防止培養(yǎng)基的波動(dòng)，在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)滿(mǎn)足釋放程度確定的需求，并有效地減少測(cè)量誤差。但是，流動(dòng)池還具有高設(shè)備價(jià)格的缺點(diǎn)，復(fù)雜的操作，易于通過(guò)異物阻止過(guò)濾器以及通過(guò)過(guò)濾器和玻璃珠易于吸附的藥物。

1.6組合方法

結(jié)合方法是指通過(guò)改善和完善采樣和分離方法，流細(xì)胞方法和透析方法來(lái)評(píng)估脂質(zhì)體體外釋放行為的方法。最常用的方法是將采樣和分離方法與透析方法結(jié)合的方法。采樣，分離和透析的組合可以利用攪拌，溫度控制，自動(dòng)采樣以及傳統(tǒng)溶解方法的流體補(bǔ)充，以及透析袋的負(fù)載和保留功能來(lái)完成對(duì)體外釋放行為的脂質(zhì)體研究的研究。

Zhang Xining等。 [21]使用薄膜分散法制備紫杉醇衍生物脂質(zhì)體，并根據(jù)籃子方法和正向透析組合方法進(jìn)行體外釋放測(cè)定。將脂質(zhì)體溶液放在透析袋中，在兩端關(guān)閉并擰緊并放入溶解籃中，然后放入溶解杯中。已將1000毫升釋放介質(zhì)添加到杯中，以確保有效釋放透析袋的一致長(zhǎng)度。釋放培養(yǎng)基為0.5％polysorbate-80溶液，旋轉(zhuǎn)速度為100R·min-1，采樣體積為10ml，并在通過(guò)有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾后過(guò)濾并測(cè)試溶液，孔徑為0.45μm。研究表明，該脂質(zhì)體具有一定的持續(xù)釋放效應(yīng)，并且釋放速率明顯低于對(duì)照組的釋放效果。

Li Wuchao等。 [22]使用乙醇注射方法制備了一種D-甘露糖改性的Baicalin陽(yáng)離子脂質(zhì)體。采樣和分離的槳法與正向透析方法結(jié)合使用。釋放培養(yǎng)基為pH 7.4磷酸鹽緩沖液。將脂質(zhì)體包裝到透析袋中，兩端夾緊并密封，放置在溶解杯中，受控溫度（37±0.5）℃，??攪拌80R·min-min-1，在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)采樣1ml，并補(bǔ)充流體，并補(bǔ)充流體，并測(cè)量藥物含量。研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體具有明顯的體外持續(xù)釋放特性，并且體外釋放行為符合Ritger-Peppas方程。

Luo Pansheng等。 [23]通過(guò)硫酸銨梯度法制備了阿霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。通過(guò)將采樣和分離小杯槳法和透析方法結(jié)合在一起，可以在體外釋放脂質(zhì)體。釋放培養(yǎng)基是磷酸鹽緩沖溶液，培養(yǎng)基為50毫升。將脂質(zhì)體溶液放在透析袋中，兩端緊密密封，放置在溶解儀表葉片的底部，受控溫度37℃，旋轉(zhuǎn)速度50R·min-1和3ml采樣體積3ml。研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體在體外具有良好的持續(xù)釋放效應(yīng)。

結(jié)合方法通常需要根據(jù)脂質(zhì)體的特征充分利用實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，并且必須對(duì)構(gòu)造的新的體外溶解方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)尿?yàn)證，以評(píng)估該方法的科學(xué)性和適用性。因此，組合方法不是通用方法。在申請(qǐng)過(guò)程中，應(yīng)注意透析袋材料，分子量保留，攪拌速度，溫度控制，釋放培養(yǎng)基的體積以及組合方法對(duì)脂質(zhì)體釋放行為的影響。

1.7其他方法

1.7.1電化學(xué)方法

自動(dòng)化的在線(xiàn)監(jiān)控可以直接測(cè)量釋放培養(yǎng)基中的藥物濃度，而不會(huì)丟失藥物或制劑，從而避免出現(xiàn)錯(cuò)誤。電化學(xué)方法是一種自動(dòng)化的在線(xiàn)監(jiān)控方法，可以快速在線(xiàn)評(píng)估體外釋放。

Mora等。 [24]使用伏安法來(lái)確定阿霉素鹽酸鹽氧化還原反應(yīng)期間產(chǎn)生的化學(xué)信號(hào)，并實(shí)時(shí)評(píng)估阿霉素在線(xiàn)的體外釋放程度。研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸阿霉素脂質(zhì)體在最初的1小時(shí)內(nèi)處于爆發(fā)階段，此后釋放該藥物。盡管該方法可以直接確定藥物的含量，但它僅適用于用電化學(xué)信號(hào)活化的藥物測(cè)定，每種藥物的靈敏度和反應(yīng)性差異很大，因此該方法的應(yīng)用具有很大的限制。

1.7.2樹(shù)脂吸附方法

基于一系列脂質(zhì)體的體外釋放方法，Jinsha [25]開(kāi)發(fā)了一種新的樹(shù)脂吸附方法，并用模型藥物對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證。該方法的原理是使用樹(shù)脂吸附釋放的免費(fèi)藥物，而樹(shù)脂則不溶于水，從而消除了在釋放培養(yǎng)基上吸附的藥物和藥物的步驟。與常規(guī)的透析方法和離心分離方法相比，樹(shù)脂吸附可以快速分離釋放的藥物，節(jié)省測(cè)量時(shí)間和成本，并且可以更好地將丙泊酚脂質(zhì)體與不同的處方過(guò)程區(qū)分開(kāi)。在這項(xiàng)研究中，金沙選擇了脂溶性麥芽糖（MD）和水溶性羥甲酸（OMT）作為模型藥物。研究發(fā)現(xiàn)，MD氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC）脂質(zhì)體和MD藻酸鈉殼聚糖層的自組裝脂質(zhì)體具有明顯的持續(xù)釋放作用。在超過(guò)MD泄漏的儲(chǔ)罐條件的條件下，樹(shù)脂吸附還可以更好地確定脂質(zhì)體釋放速率，在一定程度上，這解決了無(wú)法滿(mǎn)足泄漏儲(chǔ)罐條件的問(wèn)題。

該方法的創(chuàng)新點(diǎn)是在釋放介質(zhì)中添加一定數(shù)量的樹(shù)脂，并優(yōu)化釋放方法。該樹(shù)脂可以發(fā)揮免費(fèi)藥物的吸附作用。該方法對(duì)其他藥物的適用性需要進(jìn)一步研究。

1.7.3溶解改進(jìn)方法

溶解改進(jìn)方法主要基于通過(guò)采樣和分離方法和組合方法確定的工具和設(shè)備。它改善了影響這些方法中檢測(cè)結(jié)果的不可控制因素，改進(jìn)和優(yōu)化了設(shè)備，并在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了標(biāo)準(zhǔn)化和標(biāo)準(zhǔn)化的體外釋放測(cè)定設(shè)備。

Ou Ting使用新的槳零件來(lái)設(shè)計(jì)和改進(jìn)透析袋設(shè)備，以將透析管連接到槳。 He used the self-designed dialysis device E2 to establish a release dialysis detection method, and used this method to determine the in vitro release of doxorubicin hydrochloride liposome injection. The study found that the new method is well universal, and the improved release device has achieved the expected results in terms of stability, reproducibility, operability, normativeness, etc. ABDEL-MOTTALEB and others transformed the basket into a glass basket with a dialysis bag at the bottom, and used their comparison to study the in vitro release behavior of ibuprofen liposomes and lipid nanocapsules. The study found that compared with conventional dialysis methods, glass basket dialysis can significantly distinguish the differences in the release behavior of different liposomes in vitro.

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結(jié)論

Suitable types of release media, temperature, speed, etc. are technical challenges in the establishment of liposome in vitro release behavior methods. In addition, attention should be paid to the impact of dialysis bag material, molecular weight intercept, shape, size, pretreatment methods, etc. Dialysis bags may adsorb drugs, so pay attention to the material of the dialysis bag. Commonly used dialysis bags include cellulose acetate film and regenerated cellulose film. Among them, cellulose acetate membrane is highly hydrophobic and suitable for use when releasing hydrophilic drugs; another important parameter of dialysis bag is to retain molecular weight. Choosing a dialysis bag with appropriate molecular weight can ensure the membrane permeability of free drugs; an appropriate pretreatment method can make the dialysis bag fully swell, which is more conducive to the passage of free drugs. The common pretreatment method is to soak or boil the dialysis bag in the release medium.

Different liposome drug varieties have different release degree check methods, especially emerging or improved methods, which have poor normative characteristics, lack of research verification, and narrow scope of application, which brings uncertainty to quality control and evaluation. Therefore, establishing a release method with good repeatability, strong operability and high standardization is a major technical difficulty in the development of liposomes in vitro release behavior.

When performing the determination of liposome in vitro release behavior, the methods, test conditions and key parameters such as equipment model, medium type, stirring speed, and control temperature need to be recorded in detail, and the applicability of the release method is fully considered. In addition, a complete liposome in vitro release curve needs to be drawn, and the end point of release should be determined reasonably, at least to ensure that the release has reached the plateau period, or the cumulative release exceeds 80%. Whether using existing methods or revised and improved new methods, they should be fully verified to ensure the accuracy and reproducibility of the release method. In addition, the release method must be distinguished well, and the changes in the prescription and production process can be reflected in the release curve.

參考

See "Medical Guide" Volume 42, Issue 3, March 2023

Recent free public classes in Vanmo Valley

On March 29, Vanmo Valley will invite Dr. Anant Ketkar, chief scientist of Simulations Plus in the United States, to share "The Application of Virtual Bioequivalence Tests in the Development of New Drugs and Generic Drugs". At that time, the course will be broadcast live in English explanation + Chinese and English subtitles, and Dr. Zhou Haiying will participate in the Q&A interactive session.

Pharmaceutical colleagues are welcome to sign up for the live broadcast.